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MagBead Buccal Swabs DNA Kit

磁珠法口腔拭(shi)子DNA提(ti)取试剂盒

目录号：QYM1006S(5t), QYM1006A(20t), QYM1006B(200t)

产品内容：

产品简介(jie)：

本试剂盒(he)提(ti)供了一种简(jian)单、快速、高效的(de)用(yong)于口腔(qiang)(qiang)拭子基(ji)(ji)因(yin)组DNA提(ti)取(qu)(qu)的(de)方法，可(ke)用(yong)于提(ti)取(qu)(qu)人类口腔(qiang)(qiang)拭子基(ji)(ji)因(yin)组DNA。口腔(qiang)(qiang)拭子刮取(qu)(qu)的(de)口腔(qiang)(qiang)上皮细胞在裂(lie)解(jie)液与(yu)Proteinase K共(gong)同(tong)作用(yong)下彻底裂(lie)解(jie)，释放基(ji)(ji)因(yin)组DNA。加入结合液后，DNA大量析(xi)出，被磁珠(zhu)特(te)异(yi)性吸附。经漂洗和洗脱，得到纯净的(de)基(ji)(ji)因(yin)组DNA。可(ke)直接用(yong)于测序、PCR、克隆等下游实验。

产品特点：

所需(xu)组织量(liang)少(shao)，高效，快速。样本充分(fen)裂解(jie)后，仅需(xu)30-40min，即(ji)可获得高纯度口腔拭子基因组DNA。

单个口腔(qiang)拭子的(de)DNA得(de)率为(wei)1-3ug。

与液体工作站或磁(ci)棒法自动磁(ci)珠提(ti)取系统配套使用(yong)，可以简单、快速(su)地(di)进行大规模(mo)提(ti)取。

保存条件：

室温，4℃（磁珠, Proteinase K, RnaseA）

注(zhu)意(yi)事项

1. 口(kou)腔拭(shi)子DNA含量在不(bu)同人类个(ge)体、不(bu)同采(cai)集批次中差(cha)异较(jiao)大。

2. 若buffer SCL中(zhong)有沉淀，请在60℃水浴中(zhong)溶解后使(shi)用。

3. Proteinase K, RnaseA勿反复(fu)冻融(rong)。可在4℃保存(cun)1个(ge)月。若长期保存请放于-20℃。

操作(zuo)步骤：

1. 将一(yi)个口(kou)腔拭(shi)子转移至2ml EP管中，用1ml生(sheng)理盐水或PBS充分洗(xi)涤。将口(kou)腔拭(shi)子木杆部分折断，头部浸泡在洗(xi)涤液(ye)中，盖(gai)上管盖(gai)，涡旋混匀20s。弃去口(kou)腔拭(shi)子。

2. 将含细胞的液体(ti)12000rpm 离心1min。弃(qi)去上清。

3. 向沉淀(dian)中加(jia)入400ul buffer SCL，20ul Proteinase K（10mg/ml）。吹打混(hun)匀(yun)。60℃水浴裂解细胞15min。此时(shi)溶液变清(qing)亮。裂解细胞后，如吹吸溶液时(shi)感觉(jue)粘稠，请适当(dang)延(yan)长裂解时(shi)间。

4. 向(xiang)组织裂解液中加(jia)入(ru)10ul RnaseA (10mg/ml)，吹打(da)混匀(yun)，室温静置5min。

5. 向细胞裂解液中(zhong)加入(ru)600ul buffer PC，颠倒混匀数次(ci)。

6. 在漩涡混匀(yun)(yun)器上(shang)震荡磁珠20s，使其均(jun)匀(yun)(yun)悬(xuan)浮。向反应混合物(wu)中加(jia)入(ru)50ul MagBeads，涡旋混匀(yun)(yun)10s。室温(wen)静置(zhi)3min。将离心管插入(ru)磁力架，磁性(xing)分离。弃上(shang)清。

7. 将(jiang)离(li)心管取(qu)下(xia)，加入800ul buffer WB1。涡旋混(hun)匀10s。将(jiang)离(li)心管插入磁力架，磁性分离(li)。弃(qi)上清。

8. 将(jiang)离(li)心管(guan)取下(xia)，加(jia)入(ru)800ul buffer WB2。涡旋混(hun)匀(yun)10s。将(jiang)离(li)心管(guan)插入(ru)磁力架，磁性(xing)分离(li)。弃上清。

9. 将(jiang)离心管(guan)在磁力(li)架(jia)上开(kai)盖静置5-10min，使管(guan)内(nei)液(ye)体完全挥发(fa)。可用枪头吸弃管(guan)底、管(guan)壁残留的液(ye)滴(di)。

10. 将(jiang)离心(xin)管(guan)取(qu)下，加入(ru)50ul buffer EL。用枪(qiang)头搅(jiao)拌(ban)成团(tuan)的磁珠，吹(chui)打混匀数(shu)次，将(jiang)磁珠完全(quan)打散。60℃水(shui)浴洗脱(tuo)5min。

11. 将(jiang)离(li)心(xin)管(guan)插(cha)入(ru)磁力(li)架，磁性分离(li)。小心(xin)将(jiang)上清吸取到新的EP管(guan)中，勿吸入(ru)磁珠。上清即(ji)为(wei)口腔拭子(zi)基(ji)因组DNA。